診斷喉癌時需要與下列疾病相鑑別：
(1)喉結核：早期喉癌須和喉結核相鑑別，喉癌多發於聲帶前2/3，幾乎無原發於杓狀軟骨間切跡者。喉結核病變多位於喉的後部，表現爲喉黏膜蒼白、水腫，伴多個表淺潰瘍，如蟲蝕狀；也可出現一側聲帶充血和增厚，但會厭、杓會厭襞都有較廣泛的水腫和表淺的潰瘍。喉結核的主要症狀爲聲嘶和喉痛。肺部X線片，痰的結核桿菌檢查有助於鑑別診斷，但最終仍依賴於活檢。
(2)喉乳頭狀瘤：喉乳頭狀瘤可單發或多發，其外表粗糙、呈淡紅色，無聲帶運動障礙，而喉癌多爲單發，肉眼極難鑑別。特別是成人的喉乳頭狀瘤易惡變，更須活檢鑑別。
(3)喉澱粉樣瘤：並非真性腫瘤，可能是由於慢性炎症、血液和淋巴循環障礙、新陳代謝紊亂而引起的喉組織的澱粉樣變。表現爲聲帶、喉室或聲門下區的暗紅色腫塊，表面光滑，活檢時覺其質地較硬，不易鉗取，病理檢查易於鑑別。
(4)喉梅毒：病變多位於喉的前部，黏膜紅腫，常有梅毒瘤，繼而出現較深的潰瘍，破壞組織較多，癒合後有瘢痕收縮粘連，造成喉畸形。患者聲嘶但有力，喉痛較輕。有性病史，康-華反應陽性，活檢可得證實。喉返神經麻痹，環杓關節炎也可誤診爲喉癌。反之，喉癌也常被誤認爲喉返神經麻痹或環杓關節炎，應注意加以鑑別。喉癌還應與喉角化症、喉黏膜白斑病、呼吸道硬結病、氣管內或喉內異位甲狀腺、喉氣鞀腫及喉軟骨瘤相鑑別。
