葉酸有促進骨髓中幼細胞成熟的作用，攝入不足、吸收障礙、需求增加、藥物影響、先天因素等均可導致葉酸缺乏，誘發巨幼細胞貧血。
1、攝入不足：葉酸每天的需要量爲200-400µg。人體內葉酸的儲存量僅夠4個月之需。食物中缺少新鮮蔬菜、常見於營養不良、偏食、挑食或餵養不當的嬰幼兒中。葉酸衍生物不耐熱，過度烹煮或醃製均可使葉酸破壞引起攝入不足。
2、吸收障礙：影響空腸黏膜吸收的各類疾病如短腸綜合徵、腫瘤、手術切除及熱帶性口炎性腹瀉均可導致葉酸的吸收不足。
3、需求增加：嬰幼兒以及慢性反覆溶血、白血病、腫瘤、甲狀腺功能亢進及血液透析治療的患者，葉酸的需求都會增加，如補充不足就可發生葉酸缺乏，妊娠時尤其是最初3個月，葉酸需要量可增加5～10倍，更應注意補充。
4、藥物影響：甲氨蝶呤、苯妥英鈉、苯巴比妥、抗驚厥藥、磺胺嘧啶、氨甲蝶呤、口服避孕藥、氟尿嘧啶阿糖胞苷、異煙肼、乙胺嘧啶、環絲氨酸等藥物可影響葉酸的吸收和代謝。
5、先天因素：某些先天性物質的缺乏也可造成也算缺乏，如先天性缺乏5，10-甲酰基四氫葉酸還原酶患者。
